用途
用于定性检测血清、血浆、细胞培养上清液和组织等样本中是否含有大鼠轮状病毒sIgA抗体(RV sIgA Ab)。
检验原理
试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠 PEDV-IgA捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、阴性和阳性对照,再加入HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠 PEDV-IgA呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),判定阴阳性。
特异性
本试剂盒识别天然大鼠流行性腹泻病毒IgA抗体(PEDV-IgA),与结构类似物无交叉。
精密度
批内变异系数CV%小于10%;批间变异系数CV%小于15%。
实验所需自备物品
1、能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪
2、移液器及枪头、加样槽
3、37℃恒温箱或水浴锅
4、准备试剂用的试管、离心管、量筒等
5、蒸馏水或去离子水
操作步骤
所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
4、样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
5、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
6、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
7、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
8、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。