用途
于检测血清、血浆、细胞培养上清液和组织等样本中小鼠α黑色素细胞刺激素(α-MSH)的浓度。
检验原理
试剂盒采用酶联免疫分析方法。采用生物素标记小鼠 MDA,纯化的抗小鼠 MDA抗体包被微孔板,在竞争抑制反应中,一定量的固相抗体与生物素标记小鼠 MDA及非标记抗原(校准品或标本)进行抑制竞争反应,抗体与生物素标记的小鼠 MDA结合量受非标记抗原量所抑制,非标记抗原量多,抗体与生物素标记的小鼠 MDA结合就少,反之结合就多;反应平衡后,形成固相抗体-生物素化小鼠 MDA,再加入酶标记的亲和素,形成固相抗体-生物素化${E}-酶标-亲合素复合物。经加底物显色后,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。随着小鼠 MDA浓度的升高,OD值逐渐下降呈良好的线性关系。本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单、快速等特点,对血清中小鼠 MDA的减少或升高有可靠的检出性能。
特异性
本试剂盒识别天然小鼠α黑色素细胞刺激素(α-MSH),与结构类似物无交叉。
精密度
批内变异系数CV%小于10%;批间变异系数CV%小于15%。
实验所需自备物品
1、能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪
2、移液器及枪头、加样槽
3、37℃恒温箱或水浴锅
4、准备试剂用的试管、离心管、量筒等
5、蒸馏水或去离子水
操作步骤
所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、将预包被板从密封袋中取出,设一个空白对照孔,不加任何液体;每个校准品设2孔,每孔加入对应校准品50μl;其余每个检测孔直接加待测血清或质控品50μl。
4、除空白孔外所有孔加入生物素化抗原50μl,混匀,贴上封板膜,置37℃温育60分钟。
5、手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置10秒甩干,重复3次后拍干。洗板机洗板:选择洗涤3次程序洗板后拍干。
(提示:为获得理想的实验结果,必须彻底移除残留液体。洗板完成之后,请立即进行下步操作,不要让微孔板干燥。)
6、每孔加入酶标亲和素50μl(空白对照孔除外),混匀,贴上封板膜,置37℃温育30分钟。
7、手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置10秒甩干,重复3次后拍干。洗板机洗板:选择洗涤3次程序洗板后拍干。
8、每孔加显色剂A 50μl,显色剂B 50μl,振荡混匀后,置37℃避光显色15分钟,每孔加终止液50μl。
9、用酶标仪读数,取波长450nm,先用空白对照孔调零点,然后测定各孔光密度值(OD值)。