检测范围
0.32pmol/L - 64pmol/L
用途
于检测血清、血浆、细胞培养上清液和组织等样本中人17β-雌二醇(17β-E2)的浓度。
检验原理
采用酶联免疫竞争法检测样本中人 17β-E2含量。首先用人 17β-E2单抗包被微孔板,然后加入待测样本、辣根过氧化物酶标记人 17β-E2,使之形成人 17β-E2包被单抗-人 17β-E2(HRP)复合物,标记人 17β-E2的结合量与样本中的人 17β-E2量成反比。经显色后在酶标仪测定吸光值(OD值),通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线,反算出待测样本中人 17β-E2含量。
特异性
本试剂盒识别天然人17β-雌二醇(17β-E2),与结构类似物无交叉。
精密度
批内变异系数CV%小于10%;批间变异系数CV%小于15%。
实验所需自备物品
1、能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪
2、移液器及枪头、加样槽
3、37℃恒温箱或水浴锅
4、准备试剂用的试管、离心管、量筒等
5、蒸馏水或去离子水
操作步骤
所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、每次实验前,根据实验检测数量,按酶标抗原1/10的体积取抗体,与酶标抗原混合,制成酶标抗原混合液。例如:取3ml酶标抗原,加入0.3ml抗体混合,制成混合液。
4、将预包被板从密封袋中取出,设一个空白对照孔,不加任何液体;每个校准品依次各设两 孔,每孔加入相应校准品50μl;其余每个检测孔直接加质控品或待测血清50μl。
5、 每孔加入酶标混合液50μl(空白对照孔除外),充分混匀,贴上封板膜,置37℃温育1小时。
6、手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置10秒甩干,重复3次后拍干。洗板机洗板:选择洗涤3次程序洗板后拍干。
(提示:为获得理想的实验结果,必须彻底移除残留液体。洗板完成之后,请立即进行下步操作,不要让微孔板干燥。)
7、每孔加显色剂A液50μl,显色剂B液50μl,振荡混匀后,置37℃避光显色15分钟,每孔加终止液50μl。
8、用酶标仪读数,450nm单波长酶标仪需先用空白对照孔调零点,然后测定各孔吸光值。