用途
于检测血清、血浆、细胞培养上清液和组织等样本中鸡禽流感病毒H5N1亚型抗体(AIV-H5N1 ab)的浓度。
检验原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗鸡 AIV-H5N1 ab抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入鸡 AIV-H5N1 ab校准品和待测样本，再加入HRP标记的抗鸡 AIV-H5N1 ab抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（酸性溶液）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪450nm波长上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中鸡 AIV-H5N1 ab的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中鸡 AIV-H5N1 ab的浓度。
特异性
本试剂盒识别天然鸡禽流感病毒H5N1亚型抗体(AIV-H5N1 ab)，与结构类似物无交叉。
精密度
批内变异系数CV%小于10%；批间变异系数CV%小于15%。
实验所需自备物品
1、能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪
2、移液器及枪头、加样槽
3、37℃恒温箱或水浴锅
4、准备试剂用的试管、离心管、量筒等
5、蒸馏水或去离子水
操作步骤
所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
4、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
5、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
6、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
（提示：为获得理想的实验结果，必须彻底移除残留液体。洗板完成之后，请立即进行下步操作，不要让微孔板干燥。）
7、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
8、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
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