用途
用于定性检测血清、血浆、细胞培养上清液和组织等样本中是否含有牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体(FMDV-NSP-Ab)。
检验原理
试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被牛 IBR-IgE Ab捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、阴性和阳性对照,再加入HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛 IBR-IgE Ab呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),判定阴阳性。
特异性
本试剂盒识别天然牛传染性鼻气管炎病毒IgE抗体(IBR-IgE Ab),与结构类似物无交叉。
精密度
批内变异系数CV%小于10%;批间变异系数CV%小于15%。
试剂盒组成及保存
1、能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪
2、移液器及枪头、加样槽
3、37℃恒温箱或水浴锅
4、准备试剂用的试管、离心管、量筒等
5、蒸馏水或去离子水
实验所需自备物品
所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
4、样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
5、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
6、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
7、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
8、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。