用途
于检测血清、血浆、细胞培养上清液和组织等样本中牛结核杆菌抗体(TB Ab)的浓度。
检验原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗牛 TB Ab抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入牛 TB Ab校准品和待测样本,再加入HRP标记的抗牛 TB Ab抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(酸性溶液)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪450nm波长上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中牛 TB Ab的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中牛 TB Ab的浓度。
特异性
本试剂盒识别天然牛结核杆菌抗体(TB Ab),与结构类似物无交叉。
精密度
批内变异系数CV%小于10%;批间变异系数CV%小于15%。
试剂盒组成及保存
1、能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪
2、移液器及枪头、加样槽
3、37℃恒温箱或水浴锅
4、准备试剂用的试管、离心管、量筒等
5、蒸馏水或去离子水
实验所需自备物品
所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
4、样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
5、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
6、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
(提示:为获得理想的实验结果,必须彻底移除残留液体。洗板完成之后,请立即进行下步操作,不要让微孔板干燥。)
7、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
8、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。